طريقة جمع وتخزين واستخراج البروتينات من السائل اللثوي لاستخدامه في التحليلات البروتينية
محتوى المقالة الرئيسي
الملخص
قد يعكس السائل اللثوي (GCF) الأحداث المرتبطة بحركة الأسنان التقويمية. تم إجراء محاولات لتحديد المؤشرات الحيوية التي تعكس قوة تقويم الأسنان المثلى ، والعواقب غير المرغوب فيها (مثل ارتشاف الجذر) وطرق واساليب تسريع حركة الأسنان . ان الهدف من هذه الدراسة هوانشاء طريقة مثلى لتجميع وتخزين واستخلاص البروتين الكلي القياسي من السائل اللثوي من مواقع اللثة الصحية ظاهريا من مرضى تقويم الأسنان تتماشى مع الطرق المتطورة لتحديد وتشخيص البروتينات كمؤشرات حيوية. تضمنت الدراسة ثمانية عشر مريضًا اللذين يحتاجون إلى قلع كل من الضواحك الأولى للفك العلوي والتي تم تعيينها عشوائيًا لتسليط القوة إما للقوة الثقيلة (225 جم) أو القوة الخفيفة (25 جم) ، وتم جمع السائل اللثوي لفترات زمنية متعددة بعد ساعة واحدة ويوم واحد و 7 أيام و 14 يومًا و 21 يومًا و 28 يومًا من بدء التجربة. تم استخدام اشرطة لثوية لجمع السائل، اما محلول الفوسفات الملحي (PBS) لاستخلاص وانتزاع البروتينات من هذه الشرائط بسرعة طرد مركزي تبلغ 10000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق وتخزينها عند -80 درجة مئوية. أجري اختبار برادفورد لتقدير تركيز البروتين ، ثم تم إجراء التحليل الكهربائي لهلام دوديسيل كبريتات الصوديوم (SDS-PAGE) لمعرفة درجة نقاء البروتينات في العينات التي تم جمعها وتم التحقق من صحة طريقة الجمع عن طريق النشاف المناعي الغربي لإنزيم اللعاب ألفا أميليز. أظهر بروتوكول الجمع والتخزين واستخلاص البروتين الحالي أفضل النتائج لاستخلاص البروتين ونقاوته مع مجموعة مثبتة خالية من التلوث باللعاب. وتوصلت الدراسة الى إن حجم السائل الصغير من المواقع الصحية ومشاكل التبخر لمثل هذا السائل الواعد يحفزنا على التحقيق في بروتوكول جديد يتيح الحفظ الأمثل لعينة السائل اللثوي وقد يعمل البروتوكول المتبع حاليًا كمرجع للدراسات البروتينية المستقبلية التي تبحث عن المؤشرات الحيوية لـسائل اللثوي في تشخيص ومراقبة حركة الأسنان التقويمية.
Received 18/10/2020
Accepted 13/12/2020
Published Online First 20/9/2021
تفاصيل المقالة
هذا العمل مرخص بموجب Creative Commons Attribution 4.0 International License.
كيفية الاقتباس
المراجع
2. Currell SD, Liaw A, Blackmore Grant PD, Esterman A, Nimmo A. Orthodontic mechanotherapies and their influence on external root resorption: A systematic review. Am J Orthod Dentofac Orthop. 2019;155(3):313–29. Available from: https://doi.org/10.1016/j.ajodo.2018.10.015
3. Bostanci N, Belibasakis GN. Gingival crevicular fluid and its immune mediators in the proteomic era. Periodontol 2000. 2018;76(1):68–84.
4. Khurshid Z, Zohaib S, Najeeb S, Zafar MS, Rehman R, Ur Rehman I. Advances of proteomic sciences in dentistry. Int J Mol Sci. 2016;17(5):1–19.
5. Tsuchida S, Satoh M, Takiwaki M, Nomura F. Current status of proteomic technologies for discovering and identifying gingival crevicular fluid biomarkers for periodontal disease. Int J Mol Sci. 2019;20(1):1–11.
6. Preianò M, Falcone D, Maggisano G, Montalcini T, Navarra M, Paduano S, et al. Assessment of pre-analytical and analytical variables affecting peptidome profiling of gingival crevicular fluid by MALDI-TOF mass spectrometry. Clin Chim Acta. 2014;437:120–8. Available from: http://dx.doi.org/10.1016/j.cca.2014.07.022
7. Preianò M, Maggisano G, Murfuni MS, Villella C, Pelaia C, Montalcini T, et al. An Analytical Method for Assessing Optimal Storage Conditions of Gingival Crevicular Fluid and Disclosing a Peptide Biomarker Signature of Gingivitis by MALDI-TOF MS. Proteomics - Clin Appl. 2018;12(5):1–32.
8. Meyer UA, Zanger UM, Schwab M. Omics and Drug Response. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2013;53(1):475–502.
9. Cupp-Sutton KA, Wu S. High-throughput quantitative top-down proteomics. Mol Omi. 2020;16(2):91–9.
10. Vieira GM. Protein biomarkers of external root resorption: A new protein extraction protocol. Are we going in the right direction? Dental Press J Orthod. 2014;19(6):62–9.
11. Saloom H. The influence of obesity on orthodontic tooth movement (A clinical study) [Internet]. King’s College London Dental Institute January; 2017. Available from: https://kclpure.kcl.ac.uk/portal/
12. Laemmli UK. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nat Publ Gr. 1970;228:726–34. Available from: http://www.mendeley.com/research/discreteness-conductance-chnge-n-bimolecular-lipid-membrane-presence-certin-antibiotics/
13. Yan JX, Wait R, Harry RA, Westbrook JA, Wheeler CH, Dunn MJ. A modified silver staining protocol for visualization of proteins compatible with matrix-assisted laser desorption / ionization and electrospray ionization- mass spectrometry. Electrophoresis. 2000;1:3666–72.
14. Helmerhorst EJ. Protective functions of saliva. In: Edgar WM, Dawes C, O’Mullane DM, editors. Saliva and oral health. UK: Stephen Hancocks Limited; 2012.
15. Ghallab NA. Diagnostic potential and future directions of biomarkers in gingival crevicular fluid and saliva of periodontal diseases: Review of the current evidence. Arch Oral Biol. 2018;87:115–24. Available from: https://doi.org/10.1016/j.archoralbio.2017.12.022
16. Kapoor P, Monga N, Kharbanda OP, Kapila S, Miglani R, Moganty R. Effect of orthodontic forces on levels of enzymes in gingival crevicular fluid (GCF): A systematic review. Dental Press J Orthod. 2019;24(2):40.e1-40.e22.
17. Tarallo F, Chimenti C, Paiella G, Cordaro M, Tepedino M. Biomarkers in the gingival crevicular fluid used to detect root resorption in patients undergoing orthodontic treatment: A systematic review. Orthod Craniofacial Res. 2019;22(4):236–47.
18. Goodson J. Gingival crevice fluid flow. Periodontol 2000. 2003;31:43–54.
19. Griffiths GS. Formation, collection and significance of gingival crevice fluid. Periodontol 2000. 2003;31(11):32–42.
20. Messana I, Inzitari R, Fanali C, Cabras T, Castagnola M. Facts and artifacts in proteomics of body fluids . What proteomics of saliva is telling us ? J Sep Sci. 2008;31:1948–63.
21. Griffiths GS, Sterne JAC, Wilton JMA, Eaton KA, Johnson NW. Associations between volume and flow rate of gingival crevicular fluid and clinical assessments of gingival inflammation in a population of British male adolescents. J Clin Periodontol. 1992;19(7):464–70.
22. Buduneli N. Biomarkers in Periodontal Health and Disease/Rationale, Benefits, and Future Directions. 1st ed. Izmir, Turkey: Springer Cham; 2020. 1–90 p.
23. Saloom HF, Papageorgiou SN, Carpenter GH, Cobourne MT. Impact of Obesity on Orthodontic Tooth Movement in Adolescents: A Prospective Clinical Cohort Study. J Dent Res. 2017;96(5):547–54.
24. Saloom HF, Carpenter GH, Cobourne MT. A cross-sectional cohort study of gingival crevicular fluid biomarkers in normal-weight and obese subjects during orthodontic treatment with fixed appliances. Angle Orthod. 2019;89(6):930–5.
25. Jafari M, Mehrneja F, Rahimi F, Asghari SM. The Molecular Basis of the Sodium Dodecyl Sulfate Effect on Human Ubiquitin Structure : A Molecular Dynamics Simulation Study. Sci Rep. 2018;(September 2017):1–15. Available from: http://dx.doi.org/10.1038/s41598-018-20669-7